Techniklexikon

Phasenkontrastmikroskopie

Laboratoriumsmethoden und -geräte, mikroskopisches Verfahren zur Darstellung von Präparaten, die einen grösseren Einfluss auf die Phase als auf die Amplitude der Beleuchtungsstrahlung haben. Bei diesen sog. Phasenobjekten handelt es sich um semitransparente Objekte, die durch ihre inhomogene optische Dichte die Phase der Beleuchtungsstrahlung beeinflussen. In der Lichtmikroskopie kann die Phasenbeeinflussung durch das Objekt in der Phasenkontrastmikroskopie sichtbar gemacht werden. Dazu wird in der hinteren Brennebene des Objektives ein sog. Phasenring eingebracht. Die vom Präparat kommende Strahlung nullter Beugungsordnung wird mittels einer dünnen Metallschicht um 90° phasenverschoben. Die Interferenz der höheren Beugungsordnungen mit dem phasenverschobenen Hauptmaximum in der Zwischenbildebene liefert ein kontrastreiches Bild, das Gebiete unterschiedlicher optischer Dicke sichtbar darstellt.

Phasenkontrastmikroskopie 1:Strahlengang im Mikroskop (1 Ringblende, 2 Kondensor, 3 Objekt, 4 Objektiv, 5 Phasenplatte, 6 Objektivbrennpunkt, 7 Okularbrennpunkt, 8 Okular, 9 Auge). a) Bild ohne Ringblende und Phasenplatte, b) Bild mit Ringblende und Phasenplatte.

Phasenkontrastmikroskopie 2: Phasenobjekte: a) Amplituden-Objekt: Durch Absorption wird die Amplitude, jedoch nicht die Phase verändert, I und II interferieren zu »grau«. b) Phasen-Objekt (Brechzahlunterschied): In einem Medium grösserer Brechzahl bleibt die Welle zurück, I und II interferieren zu »dunkel«. c) Phasen-Objekt: (Wegunterschied): In einem dickeren Medium bleibt die Welle zurück, I und II interferieren zun »dunkel«.

Phasenkontrastmikroskopie 3: Speicheldrüsenchromosom in einer a) Hellfeld- und b) Phasenkontrastaufnahme.